Тема:
Опубликовано:
11/2008
Тип:
Клиническое исследование

Церебролизин облегчает состояние больных с перинатальным поражением ЦНС через модуляцию аутоиммунитета и антиоксидантную защиту

Известно, что между нервной, эндокринной и иммунной системами существуют множественные связи обеспечивающие физиологическую иммунорегуляцию. Нарушение их взаимодействия приводит к развитию целого ряда заболеваний [8]. Так, нарушения взаимной регуляции нервной и иммунной систем приводят к перинатальным поражениям ЦНС (ПП ЦНС) которые занимают одно из ведущих мест в структуре заболеваемости новорожденных и являются частой причиной детской инвалидности [2, 5].

Существует большое количество факторов, влияющих на возникновение перинатальных поражений ЦНС, включая неблагоприятную экологическую обстановку (в частности, ионизирующее излучение, токсические воздействия, в том числе при применении различных лекарственных веществ, загрязнение окружающей среды солями тяжелых металлов и промышленными отходами), осложнения беременности и т.д. При этом, одним из ведущих антенатальных факторов, вызывающих ПП ЦНС плода, является фетоплацентарная недостаточность [12]. Перинатальные повреждения ЦНС плода являются прямым следствием активации ишемического каскада, который с одной стороны приводит к гибели нервных клеток путем апоптоза, а с другой — к изменениям церебрального кровотока плода [1]. Можно выделить несколько путей индукции запрограммированной гибели клетки, в конечном итоге приводящих к активации каспазы-3, ключевого эффекторного белка в каскаде апоптоза, расщеплению ядерных субстратов данным ферментом и фрагментации ДНК [10]. Один из основных путей включения апоптоза связан с так называемыми рецепторами смерти плазматической мембраны (англ. death receptors) [11].

В последние годы значительное количество работ, посвященных изучению нейронального апоптоза, было выполнено на животных [6, 17]. Исследования же, посвященные изучению апоптоза лимфоцитов у новорожденных детей с перинатальными гипок-сическими поражениями ЦНС практически отсутствуют. Недостаточно изученными также остаются эндогенные факторы, направленные на ограничение и восстановление очагов поражения нервной ткани.

Целью настоящей работы было изучение нейро-протекторного действия препарата церебролизин в иммунологическом аспекте с учетом состояния антиок-сидантной защиты.

Церебролизин обладает нейротрофической активностью, сходной с активностью фактора роста нервов, нейропротективными свойствами, за счет антиапоптозного действия и повышения пластичности нейронов [3]. Эффективность применения церебролизина в лечении детей с минимальной мозговой дисфункцией, последствиями закрытой черепно-мозговой травмы, ночным энурезом, гипоакузией хорошо освещена в литературе. В то же время, данные о применении церебролизина в терапии новорожденных с тяжелыми перинатальными поражениями ЦНС в остром периоде заболевания отсутствуют, а об использовании его в раннем восстановительном периоде имеются лишь единичные публикации [25].

Изучение особенностей триггерных процессов включения апоптоза, регулирующих его факторов, и влияния на них церебролизина позволит уточнить механизмы формирования ПП ЦНС у новорожденных и оптимизировать методы их лечения у новорожденных первого месяца жизни. В настоящей работе, мы исследовали влияние курса применения церебролизина на различные биомаркеры: экспрессию Fas и FasL на клеточной мембране лимфоцитов периферической крови, внутриклеточную экспрессию мРНК МТ-1, а также сывороточный уровень глиофибриллярного белка (GFAP).

Материалы и методы

Наблюдали 40 детей первого месяца жизни, 20 из которых составили группу пациентов и 20 здоровых доношенных новорожденных — контрольную группу.

Пациентами были дети с перинатальными гипок-сически-ишемическими поражениями ЦНС средней степени тяжести с оценкой по шкале Апгар на 1-й минуте жизни 6,83±0,4, на 5-й минуте — 8,0±0,26. Диагноз ставился на основании данных клинического обследования и результатов нейросонографии. Степень гипоксических поражений ЦНС оценивали согласно классификации перинатальных поражений нервной системы у новорожденных Российской ассоциации специалистов перинатальной медицины1.

Основными клиническими проявлениями патологии ЦНС были: гипертензивный синдром у 6 детей, гипертензивно-гидроцефальный синдром у 1 новорожденного, синдром угнетения — у 2 детей и внутрижелудочковые кровоизлияния 1 степени — у 1 новорожденного.

Церебролизин назначался по показаниям из расчета по 0,1 мл на кг/массы тела внутримышечно через день, 10 инъекций на курс. Пациенты были обследованы дважды — до и после лечения препаратом церебролизин.

Получение сыворотки периферической крови. Материалом для исследования служила периферическая кровь из локтевой вены. Для исследования сывороточного содержания различных биологических продуктов кровь в количестве 1 мл отбирали в сухую центрифужную пробирку, оставляли на 10—15 мин до полного свертывания, сгусток крови осторожно обводили по стенке пробирки длинной иглой и центрифугировали при 1500 об/мин 10 мин. Отделившуюся от сгустка сыворотку аликвотами по 200 мкл разливали в пробирки типа Эппендорф и хранили до проведения исследования в холодильнике при температуре —20°С. При необходимости сыворотки хранили при —80°С и в дальнейшем использовали для оценки уровня GFAP.

Выделение мононуклеарных клеток. Кровь забирали в центрифужные пробирки, содержащие 2,7% раствор ЭДТА из расчета 3 мл крови на 1 мл раствора ЭДТА. Выделение мононуклеарных клеток из периферической крови осуществляли традиционным методом скоростного центрифугирования при 1500 об/мин в градиенте плотности фиколл-урографина. Жизнеспособность мононуклеарных клеток, определяемая по окрашиванию трипановым синим, составляла не менее 95%. По данным световой микроскопии, кольцо клеток в интерфазе содержало 25—35% лимфоцитов и 60—70% макрофагов. Выход клеток в индивидуальных образцах варьировал от 0,1 до 0,25х106 кл/г ткани.

Проточная цитофлюориметрия. Для проточной цитометрии использовали общую фракцию мононуклеарных клеток. Количество клеток, экспрессирующих Fas и FasL, определяли с помощью моноклональных антител (мАТ) методом проточной цитофлюориметрии на приборе FACScan (Весton Dickinson, USA). В качестве флюорохромных меток использовали флюоресцеин изотиоционат (FITC) и фикоэритрин (РЕ). Фирма-производитель и клон используемых в исследовании мАТ указаны в табл. 1. Процедуру окрашивания и фиксации клеток проводили стандартным способом в соответствии с указаниями фирмы-разработчика. При проведении проточной цитометрии клетки использовали в конечной концентрации lxl06 кл/мл. К 50 мкл суспензии клеток в концентрации lxl06 кл/мл добавляли 20 мкл мАТ, меченных FITC или РЕ, инкубировали в темноте при комнатной температуре в течение 30 мин, затем клетки отмывали в 1 мл фосфатного буфера (PBS), содержащего 0,1% азид натрия, и фиксировали в соответствии со стандартной процедурой. Для анализа неспецифического окрашивания использовали Simultest Control (мышиные IgGl-FITC + IgG2a-PE, «Becton Dickinson», CIIIA). Для наложения оптимального окна дискриминации для лимфоцитов и моноцитов/макрофагов на точечном графике прямого и бокового светорассеяния клетки метили анти-С045 и анти-СБ14 антителами. При анализе лимфоцитарный гейт включал не менее 95—98% клеток с фенотипом CD45+CD14—. В каждом образце анализировали не менее 10 000 клеток. Анализ результатов проводили в программе LYSYS II.

Таблица 1. Моноклональные антитела использованные в работе

Антитело Клон Фирма-производитель Флюорохром
CD95(Fas/APO-l) DX2 CALTAG Laboratories, США РЕ
CD45 ICO-46 НПЦ "МедБиоСпектр", Россия FITC
CD14 ICO-174 НПЦ "МедБиоСпектр", Россия РЕ
CD95L, FasL Alf-2.1 CALTAG Laboratories, США РЕ
Мышиные IgGl Becton Dickinson, США FIFC
Мышиные IgG2a Becton Dickinson, США РЕ

Определение уровня мРНК металлонионенинов (МТ-1) методом RT-PCR. Процедуру выделения тотальной РНК из лимфоцитов проводили стандартным гуанидин-тиоцианат-фенол-хлороформным методом с использованием набора реагентов Онкоскрин (ООО «ГеноТехнология», Россия). В работе использовали следующие наборы ООО «Генотехнология» для проведения RT-PCR в реальном времени: для определения мРНК МТ-1 — Иммуноскрин-160, мРНК в2-микроглобулина — Онкоскрин-120. Полуколичественное определение экспрессии мРНК цитокинов проводили с использованием стандартных протоколов TagMan Cytokine Gene Expression Plate (I) (PE Applied Biosystems) и BIO-SOURCE INTERNATIONAL. Для определения интенсивности флюоресцентного сигнала использовался прибор iCycler (BIO-RAD). В каждом образце одновременно определялся уровень экспрессии специфической мРНК МТ-1 и гена в2-микроглобулина, используемого в качестве внутреннего контроля. Затем, уровень экспрессии мРНК МТ-1 нормализовался относительно экспрессии мРНК внутреннего контроля в2-микроглобулина. Для этого рассчитывался показатель ΔCt по формуле: ΔCt=Ct (МТ—1) — Ct (в2м), где Ct (МТ—1) — цикл начала амплификации для гена МТ—1, a Ct (в2м) — цикл начала амплификации для гена в2-микроглобулина. Для полуколичественной оценки результатов RT-PCR, уровень экспрессии мРНК МТ-1 в группе с ПП ЦНС нормализовали относительно соответствующих показателей в группе здоровых детей по стандартной формуле: RQ=2^(-ΔΔCt), где ΔΔCt=ΔCt (Здоровые)-ΔCt (ПП ЦНС). Таким образом, все результаты представлены как n-кратные различия между соответствующими показателями группы здоровых детей и группы детей с ПП ЦНС.

Определение содержания GFAP методом ELISA. Содержание глиофибриллярного фактора (GFAP) в сыворотке крови оценивали методом ELISA на микропланшетном ридере Multiscan EX Labsystems (Финляндия) с использованием тест-систем BioVendor Laboratory Medicine, Inc, Чехия.

Статистическая обработка данных проводилась с использованием прикладных программ Statistica 6.0.

Результаты

Экспрессия Fas и FasL. Как видно из представленных в табл. 2 данных, в периферической крови новорожденных с перинатальными гипоксически-ишемическими поражениями ЦНС уровень лимфоцитов, экспрессирующих Fas — антиген, был достоверно ниже, а содержание FasL-позитивных клеток достоверно выше, чем у детей контрольной группы (p<О,001 в обоих случаях). После лечения препаратом церебролизин у детей с ПП ЦНС анализируемые нами параметры периферической крови достоверно изменялись по сравнению с аналогичными показателями этих детей до лечения. Установлено, что после лечения препаратом церебролизин у новорожденных с ПП ЦНС в периферической крови повышалось содержание Fas-позитивных лимфоцитов на фоне снижения ими поверхностной экспрессии FasL (p<0,001 в обоих случаях). При этом оба показателя становились сопоставимыми с аналогичными параметрами новорожденных контрольной группы.

Определение содержания GFAP. Анализ сывороточного содержания GFAP — основного структурного белка астроцитов, являющегося маркером повреждения нервной ткани показал, что у обследованных нами больных уровень GFAP в периферической циркуляции практически не отличался от параметров детей контрольной группы (p>0,05, см. табл. 2). После проведенного лечения церебролизином наблюдалось достоверное повышение уровня GFAP в сыворотке крови больных детей, по сравнению с аналогичным показателем как у этих детей до лечения, так и здоровых новорожденных (p<0,01).

Таблица 1. Экспрессия Fas и FasL лимфоцитами периферической крови и сывороточное содержание GFAP у детей с перинатальными поражениями и здоровых

Показатели Больные дети до лечения (n=20) Больные дети после лечения (n=20) Контрольная группа (n=20)
CD95+, % 13,66±1,10 (р<0,001*) 20,19±0,51 (р<0,001#) 17,71±1,48
CD95L+, % 18,3±1,25 (р<0,001*) 11,77±0,55(р<0,001#) 12,02±0,80
GFAP, нг/мл 0,002±0,001 0,06±0,01 (р<0,01#) 0

Примечание. * — относительно показателей группы здоровых детей; # — относительно показателей группы детей с ПП ЦНС до лечения церебролизином.

Оценка экспрессии мРНКМТ-1. Повреждение клеток, в частности при перенесенной гипоксии, сопровождается активацией защитных механизмов, одним из которых является внутриклеточный синтез белков металлотионеинов (МТ). Мы изучили экспрессию мРНК МТ-1 в лимфоцитах периферической крови у больных детей до и после лечения препаратом церебролизин. Как видно из представленных на рисунке данных, у детей с гипоксически-ишемическими ПП ЦНС экспрессия мРНК МТ-1 лимфоцитами периферической крови была минимальной. В то же время, сразу после курса лечения церебролизином, уровень экспрессии мРНК МТ-1 лимфоцитами у новорожденных с патологией был в несколько раз выше, чем у здоровых детей.

Обсуждение

Экспрессия Fas, FasL и апоппгоз Т-лимфоцитов. Согласно современным представлениям [4, 7, 9, 13— 16, 18—24, 26—33] апоптоз и оксидантный эффект играют важную роль в функционировании клеток нервной системы. В настоящее время, апоптоз при ишемических повреждениях мозга ишемия — реперфузия в экспериментах на моделях у крыс достаточно полно изучен [27]. Апоптоз, по всей видимости, играет схожую роль в развитии церебральной ишемии in vivo [19, 20]. Апоптоз, включаемый рецепторами плазматической мембраны, опосредуется специфическими взаимодействиями по типу рецептор-ли-ганд. Fas является одним из наиболее важных рецепторов инициирующих апоптоз: взаимодействие Fas-лиганда с Fas-рецептором целевой клетки приводит к инициации апоптоза. Известно, что при различных поражениях мозга экспрессия системы Fas-FasL оказывается в нем повышенной. Фетальные астроциты в культуре постоянно экспрессируют Fas и Fas-лиганд и их экспрессия повышается под воздействием целого ряда цитокинов — IL-1, IL-6, TNF-б или IFN-r [6, 17]. Генетические дефекты в генах FAS и FASL приводят к аутоимунным заболеваниям вследствие избыточной пролиферации Т-лимфоцитов [21, 33], а избыточная экспрессия белков Fas и FasL соответствует усиленному апоптозу Т-лимфоцитов.

Мы исследовали экспрессию Fas и FasL на поверхности лимфоцитов у новорожденных с ишеми-ческими поражениями ЦНС. По сравнению с контролями, в лимфоцитах пациентов наблюдались повышенные уровни FasL и пониженные уровни Fas-рецептора. Следует рассмотреть два основных последствия этих патологических изменений: влияние на пролиферацию/апоптоз лимфоцитов и влияние на апоптоз нейронов. Система Fas-FasL служит для регуляции численности колоний Т-лимфоцитов [20]. Известно, что активация лимфоцитов приводит к повышению экспрессии FasL и чем дольше активирован Т-лимфоцит, тем более чувствительным он становится к FasL-вызываемому апоптозу [15]. Таким образом, повышение FasL соответствует активации Т-лимфоцитов, а понижение уровня Fas-понижению апоптоза лимфоцитов. Оба этих фактора приводят к увеличению численности колоний активных Т-лимфоцитов и, как следствие, к аутоимунным эффектам у пациентов.

Лимфоциты являются одними из самых мобильных клеток организма которые взаимодействуют практически с любыми другими типами клеток и, в частности, с нейронами. Следовательно, взаимодействие лимфоцитов с повышенной экспрессией FasL будет приводить к усилению процессов апоптоза нейронов головного мозга. Мы установили, что применение церебролизина к нормализации уровней FasL и Fas. Таким образом, церебролизин способствует уменьшению апоптоза нейронов (вследствие уменьшения уровня экспрессии FasL), а также усилению апоптоза Т-лимфоцитов (увеличение экспрессии Fas-рецептора) и, как следствие, уменьшению воспаления и снятию отека.

Уровни экспрессии генов металлотионеинов. В регуляции процессов апоптоза участвуют различные белки, в том числе металлотионеиновые белки (МТ). Токсичные металлы ассоциируются с окислительным стрессом и цитотоксичностью. Металлотионеины являются сборщиками токсических катионов (таких как медь, свинец или кадмий) и оказывают антивоспалительное воздействие. Металлотионеины богаты цистеиновыми сайтами, что позволяет этим белкам связывать большое количество катионов на одну молекулу белка (см. рисунок).

Уровень экспрессии мРНК МТ-1 периферическими лимфоцитами новорожденных с ПП UHC до и после применения церебролизина.

Церебролизин облегчает состояние больных с перинатальным поражением ЦНС через модуляцию аутоиммунитета и антиоксидантную защиту

Уровень экспрессии мРНК МТ-1 нормализован относительно экспрессии мРНК b2-микроглобулина, результаты представлены как отношение транскрипционного уровня мРНК МТ-1 к соответствующим показателям лимфоцитов периферической крови здоровых новорожденных (RQ — см. в тексте).

Индукция синтеза МТ клетками различного происхождения является универсальной реакцией на воздействие разнообразных стрессовых факторов, что в итоге приводит к защите клетки от оксидативного стресса и от запуска процесса запрограммированной клеточной гибели [32]. Антиапоптотическое действие МТ может реализовываться несколькими путями: уменьшением уровня р53 [14, 26], запуском митохон-дриального пути апоптоза через активацию каспазы-3 [22, 31], а акже через поддержку целостности гемато-энцефалического барьера при гипоксии [30]. Следует отметить, что МТ-1 и МТ-2 активно экспрессируются в различных типах клеток, в том числе лимфоцитах и клетках нервной ткани [23, 29]. Кроме того, их уровень значительно повышен в быстро делящихся клетках, в частности в нейронах и астроцитах.

Изучая экспрессию гена МТ-1 в лимфоцитах периферической крови мы установили, что у детей с ПП ЦНС уровень экспрессии мРНК МТ-1 лимфоцитами периферической крови был значительно ниже, чем у здоровых новорожденных. Таким образом, пациенты находились при большем риске оксидантных повреждений. После прохождения курса инъекций церебролизина, экспрессия мРНК МТ-1 в лимфоцитах пациентов усиливалась. Это свидетельствует о способности церебролизина оказывать нейропротектив-ный эффект через повышенную продукцию МТ-1 клетками, что хорошо согласуется с полученными нами ранее данными [6, 7].

Уровни глиофибриллярного белка в сыворотке. Появление в крови нейроспецифических белков является маркером нарушения проницаемости гематоэн-цефалического барьера [9, 13] при перинатальных гипоксически-ишемических поражениях центральной нервной системы. Повышение их концентрации в сыворотке по сравнению с базальным уровнем, как правило, отражает объем повреждения нервной ткани. Глиофибриллярный белок (GFAP) является одним из нейроспецифических белков [13, 28]. В зрелой нервной ткани иммунологическими методами GFAP обнаруживается внутри микрофиламентов протоплазматических астроцитов серого вещества [18]. Определение сывороточного содержания GFAP используется в диагностике опухолей ЦНС астроцитар-ного происхождения, болезни Альцгеймера, рассеянного склероза, ишемических и травматических поражений ЦНС, а также при других нервно-психических заболеваниях у взрослых и детей старшего возраста. У недоношенных детей с ПП ЦНС уровень GFAP в пуповинной крови коррелировал со степенью тяжести патологии нервной системы [9].

У обследованных нами новорожденных с ПП ЦНС уровень GFAP в периферической циркуляции практически не отличался от параметров детей контрольной группы (p>0,05). Однако после проведенного лечения препаратом церебролизин наблюдалось достоверное повышение сывороточного уровня GFAP у пациентов по сравнению со здоровыми новорожденными. При ишемических инфарктах, в зонах повреждения мозговой ткани отмечается резкое нарушение кровообращения, вследствие чего элиминация НСБ из этих участков мозга значительно затрудняется [13]. Можно предположить, что церебролизин нормализует кровообращение в мозге, и за счет этого временно повышается уровень GFAP в крови.

Таким образом при ПП ЦНС обострение аутоимунных реакций (вследствие, например, неадекватного взаимодействия с иммунной системой матери) является одной из важных причин развития заболевания. При исследовании нейропротекторного действия церебролизина у новорожденных с перинатальными повреждениями было установлено, что применение церебролизина способствует уменьшению апоп-тоза нейронов (вследствие уменьшения уровня экспрессии FasL), усилению апоптоза Т-лимфоцитов (увеличение экспрессии Fas-рецептора), усилению экспрессии металлотионенина имеющего антиоксидантный эффект. Применение этого препарата может способствовать уменьшению воспаления и снятию отека тканей головного мозга, что и подтверждается наблюдаемыми изменениями уровней глиофибриллярного белка.

Литература

  1. Барашнев Ю.И. Перинатальные повреждения нервной системы у новорожденных. Руководство по безопасному материнству. М: Триада-Х 1998; 373-432.
  2. Барашнев Ю.И. Перинатальная неврология. М: Триада-Х 2001; 638.
  3. Барашнев Ю.И. Гипоксическая энцефалопатия: гипотезы патогенеза церебральных расстройств и поиск методов лекарственной терапии. Рос вестн перинатол и педиат 2002; 1: 6-13.
  4. Березин В.А., Белик Я.В. Специфические белки нервной ткани. Киев 1990; 264.
  5. Володин Н.Н., МедведевМ.И., Рогаткин СО. Перинатальная энцефалопатия и ее последствия — дискуссионные вопросы семиотики и терапии. Рос педиат журн 2001; 1: 4-8.
  6. Громова О.А., Сотникова Н.Ю. Нейроиммуномодулирующие свойства церебролизина. Цитокины и воспаление 2004; 3: 2: 34-39.
  7. Громова О.А., Сотникова Н.Ю., Катаев СИ. и др. Протективная роль церебролизининдуцированной экспрессии генов метал-лотионеина-I и металлотионеина-П при церебральной очаговой ишемии у крыс. Цитокины и воспаление 2005; 4: 1: 42-45.
  8. Крыжановский Г.Н., Магаева С.В., Макаров С.В. Нейроиммунопатология изд. Института общей патологии и патофизиологии РАМН. М 1997; 562.
  9. Рогаткин CO., Гурина О.И., Володин Н.Н. Перспективы иммунологического определения нейроспецифических белков для диагностики перинатальных поражений ЦНС у новорожденных. Педиатрия 2001; 4: 35-43.
  10. Самуилов В.Д. Биохимия программируемой клеточной смерти (апоптоза) у животных. Соросовский образовательный журн 2001; 7: 10: 18-25.
  11. Фильченков А.А., Степанов Ю.М., Липкин В.М., Кушлинский Н.Е. Участие системы Fas/Fas-лиганд в регуляции гомеостаза и функционировании клеток иммунной системы. Аллергол и иммунол 2002; 3: 1: 24-35.
  12. Черданцева Г.А., Севастьянова О.Ю., Ширяева Е.К. и др. Модель формирования повреждения центральной нервной системы у новорожденных детей в зависимости от клинической формы фетоплацентарной недостаточности у матери и профилактика ранней инвалидизации в младенческом возрасте. Пособие для научных работников. Екатеринбург 1999; 35.
  13. Чехонин В.П., Лебедев СВ., Блинов Д.В. и др. Патогенетическая роль нарушения проницаемости гематоэнцефалического барьера для нейроспецифических белков при перинатальных гипоксически-ишемических поражениях центральной нервной системы у новорожденных. Вопр гинекол акуш и перинатол 2004; 3: 2: 50-61.
  14. Abdel-MageedA., Agrawal КС Antisense down-regulation of metal-lothionein induces growth arrest and apoptosis in human breast carcinoma cells. Cancer Gene Ther 1997; 4: 3: 199-207.
  15. Andersen M.H., Schrama D., Thor Straten P., Becker J. С Cytotoxic T cells. J Invest Dermatol 2006; 126: 1: 32-41.
  16. Berkelbach van der Sprenkel J.W., Tulleken K.A.F., Nicolay К Dynamics of cerebral tissue injury and perfusion after hypoxia-ischemia in the rat. Stroke 1998; 29: 695-704.
  17. Beyaert R., Van Гоо G., Heyninck K, Vandenabeele P. Signaling to gene activation and cell death by tumor necrosis factor receptors and Fas. Int Rev Cytol 2002; 214: 225-272.
  18. Bignami A., End E.F., Dahl D., Uyeda C.T. Localization of the glial fibrillary acidic protein in astrocytes by immunofluorescence. Brain Res 1972; 43: 429.
  19. Chan P.H. Reactive oxygen radicals in signaling and damage in the ischemic brain. J Cereb Blood Flow Metab 2001; 21: 2-14.
  20. Choi C, Benveniste E.N. Brain Res Rev 2004; 44: 65-81.
  21. Fisher G.H., Rosenberg F.J., Straus S.E. et al. Dominant interfering Fas gene mutations impair apoptosis in a human autoimmune lym-phoproliferative syndrome. Cell 1995; 81: 6: 935-946.
  22. Kang Y.J., Fi Y., Sun X. Antiapoptotic Effect and Inhibition of Ischemia/Reperfusion-Induced Myocardial Injury in Metal-lothionein-Overexpressing Transgenic Mice. Am J Pathol 2003; 163: 1579-1586.
  23. KohlerF.B., Berezin V., Bock E., Penkowa M. The role metallothionein II in neuronal differentiation and survival. Brain Res 2003; 992: 1: 128-136.
  24. Martin-Villalba A., Herr F, Jeremias F et al. CD95 ligand (Fas-L/ APO-1L) and tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand mediate ischemia-induced apoptosis in neurons. J Neurosci 1999; 19: 10: 3809-3817.
  25. Noshita N, Sugawara Т., Hayashi T. et al. Copper/zinc superoxide dismutase attenuates neuronal cell death by preventing extracellular signal-regulated kinase activation after transient focal cerebral ischemia in mice. J Neurosci 2002; 22: 7923-7930.
  26. Rongxian J., Chow V.T.-K, Tan P.-H. et al. Metallothionein 2A expression is associated with cell proliferation in breast cancer. Car-cinogenesis 2002; 23: 1: 81-86.
  27. Sullivan J.M., DeGracia D.J., О’Neil B.J. et al. Brain ischemia and reperfusion: molecular mechanisms of neuronal injury. J Neurol Sci 2000; 179: 1-33.
  28. Uchida N, He D., Reitsma R et al. J Neurosci 1999; 25: 1767.
  29. Vandeghinste N, Proost P., De Fey M. Metallothionein isoform gene expression in zinc treated human peripheral blood lymphocytes.Cell Mol Biol 2000; 46: 419-433.
  30. van Fookeren Campagne M., Thibodeaux H., van Bruggen N. et al. Evidence for a protective role of metallothionein-1 in focal cerebral ischemia. Proc Natl Acad Sci USA 1999; 96: 22: 12870-12875.
  31. Wang G.-W., Zhou Z., Klein J.B., Kang Y.J. Inhibition of hypoxia/ reoxygenation-induced apoptosis in metallothionein-overexpressing cardiomyocytes. Am J Physiol Heart Circ Physiol 2001; 280: 2292- 2299.
  32. West A.K, Chuah M.F, Vickers J.C, Chung R.S. Protective role of metallothioneins in the injured mammalian brain. Rev Neurosci 2004; 15: 3: 157-166.
  33. Wu J., Wilson J., He J. et al. Fas ligand mutation in a patient with systemic lupus erythematosus and lymphoproliferative disease. J Clin Invest 1996; 98: 5: 1107-1113.

 

1 Классификация перинатальных поражений нервной системы и их последствий у детей первого года жизни. Методические рекомендации. М 2006.

 

Скачать статью (pdf, 331 КБ)

 
 

Церебролизин облегчает состояние больных с перинатальным поражением ЦНС через модуляцию аутоиммунитета и антиоксидантную защиту